Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата

Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата

Показано, что из 50 глифосат устойчивых мутантов, полученных с помощью N-метил-N -нитро-нитрозогуанидина, 36 передавали признак глифосат устойчив о ста реципиентам и являются мутантами лишь по одному гену. Ни у одного мутанта не изменено про­никновение глифосат а в клетку и ни у одного не обнаружено...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Date:1994
Main Authors: Черепенко, Е.И., Карпенко, О.И., Малюта, С.С.
Format: Article
Language:Russian
Published: Інститут молекулярної біології і генетики НАН України 1994
Series:Биополимеры и клетка
Online Access:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155398
Tags: Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата / Е.И. Черепенко, О.И. Карпенко, С.С. Малюта // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 3-4. — С. 79-83. — Бібліогр.: 12 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-155398
record_format dspace
spelling nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-1553982025-02-09T23:24:51Z Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата Генетичні механізми стійкості клітин Escherichia coli до амінокислотних антиметаболітів. 1. Пошук генів, відмінних від мішені дії гліфосату Genetic mechanisms of Escherichia coli cell resistance to amino acid antimetabolites. 1. Search for genes other than glyphosate target gene Черепенко, Е.И. Карпенко, О.И. Малюта, С.С. Показано, что из 50 глифосат устойчивых мутантов, полученных с помощью N-метил-N -нитро-нитрозогуанидина, 36 передавали признак глифосат устойчив о ста реципиентам и являются мутантами лишь по одному гену. Ни у одного мутанта не изменено про­никновение глифосат а в клетку и ни у одного не обнаружено ускорения реассоциации ДНК, свидетельствующего об амплификации гена, кодирующего мишень действия глифосата. Полученные мутации локализованы в четырех локусах хромосомы Е. coli, дале­ко отстоящих друг от друга и от гена-мишен. Показано, що з 50 гліфосатстійких мутантів, отримамих за допомогою N-метил-N-нітро-нітрозогуанідину, 36 передавали ознаку гліфосатстійкості реципієнтам i є мутанта­ми лише за одним геном. У жодного з них не змінена проникність гліфосату до клітини i в жодного не виявлено прискорення реасоціації ДНК, яке б свідчило про ампліфікацію гена, кодуючого мішень дії пифосату. Одержані мутації локалізовані у чотирьох локусах хромосоми Е. coli, що знаходяться далеко один від одного i від гена мішені. Conjugation donor Hfr C prototrophic cells were treated with NNG and glyphosate resistant cells were selected. Out of 50 mutants obtained 36 transferred the trait of glyphosate resistance to recipient cells showing that only a single gene was mutated. No changes in glyphosate penitration into mutant cells studied were shown. No changes in ColiE of mutant DNA were found which could be if pronounced amplification of aroA locus occurred. Mutants obtained were shown to be localized at 4 located far from each other and from aroA gene. 1994 Article Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата / Е.И. Черепенко, О.И. Карпенко, С.С. Малюта // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 3-4. — С. 79-83. — Бібліогр.: 12 назв. — рос. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.0003B2 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155398 631.52+632.954.576.7 ru Биополимеры и клетка application/pdf Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection DSpace DC
language Russian
description Показано, что из 50 глифосат устойчивых мутантов, полученных с помощью N-метил-N -нитро-нитрозогуанидина, 36 передавали признак глифосат устойчив о ста реципиентам и являются мутантами лишь по одному гену. Ни у одного мутанта не изменено про­никновение глифосат а в клетку и ни у одного не обнаружено ускорения реассоциации ДНК, свидетельствующего об амплификации гена, кодирующего мишень действия глифосата. Полученные мутации локализованы в четырех локусах хромосомы Е. coli, дале­ко отстоящих друг от друга и от гена-мишен.
format Article
author Черепенко, Е.И.
Карпенко, О.И.
Малюта, С.С.
spellingShingle Черепенко, Е.И.
Карпенко, О.И.
Малюта, С.С.
Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата
Биополимеры и клетка
author_facet Черепенко, Е.И.
Карпенко, О.И.
Малюта, С.С.
author_sort Черепенко, Е.И.
title Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата
title_short Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата
title_full Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата
title_fullStr Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата
title_full_unstemmed Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата
title_sort генетические механизмы устойчивости клеток escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. поиск генов, отличных от мишени действия глифосата
publisher Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
publishDate 1994
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/155398
citation_txt Генетические механизмы устойчивости клеток Escherichia coli к аминокислотным антиметаболитам. 1. Поиск генов, отличных от мишени действия глифосата / Е.И. Черепенко, О.И. Карпенко, С.С. Малюта // Биополимеры и клетка. — 1994. — Т. 10, № 3-4. — С. 79-83. — Бібліогр.: 12 назв. — рос.
series Биополимеры и клетка
work_keys_str_mv AT čerepenkoei genetičeskiemehanizmyustoičivostikletokescherichiacolikaminokislotnymantimetabolitam1poiskgenovotličnyhotmišenideistviâglifosata
AT karpenkooi genetičeskiemehanizmyustoičivostikletokescherichiacolikaminokislotnymantimetabolitam1poiskgenovotličnyhotmišenideistviâglifosata
AT malûtass genetičeskiemehanizmyustoičivostikletokescherichiacolikaminokislotnymantimetabolitam1poiskgenovotličnyhotmišenideistviâglifosata
AT čerepenkoei genetičnímehanízmistíikostíklítinescherichiacolidoamínokislotnihantimetabolítív1pošukgenívvídmínnihvídmíšenídííglífosatu
AT karpenkooi genetičnímehanízmistíikostíklítinescherichiacolidoamínokislotnihantimetabolítív1pošukgenívvídmínnihvídmíšenídííglífosatu
AT malûtass genetičnímehanízmistíikostíklítinescherichiacolidoamínokislotnihantimetabolítív1pošukgenívvídmínnihvídmíšenídííglífosatu
AT čerepenkoei geneticmechanismsofescherichiacolicellresistancetoaminoacidantimetabolites1searchforgenesotherthanglyphosatetargetgene
AT karpenkooi geneticmechanismsofescherichiacolicellresistancetoaminoacidantimetabolites1searchforgenesotherthanglyphosatetargetgene
AT malûtass geneticmechanismsofescherichiacolicellresistancetoaminoacidantimetabolites1searchforgenesotherthanglyphosatetargetgene
first_indexed 2025-12-01T16:56:37Z
last_indexed 2025-12-01T16:56:37Z
_version_ 1850325808111943680
fulltext УДК 631.52+632.954.576.7 Е. И. Черепенко, О. И. Карпенко, С. С. Малюта ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ УСТОЙЧИВОСТИ КЛЕТОК ESCHERICHIA COLI К АМИНОКИСЛОТНЫМ АНТИМЕТАБОЛИТАМ. 1. ПОИСК ГЕНОВ, ОТЛИЧНЫХ ОТ МИШЕНИ ДЕЙСТВИЯ ГЛИФОСАТА Показано, что из 50 глифосат устойчивых мутантов, полученных с помощью N-метил-• N -нитро-нитрозогуанидина, 36 передавали признак глифосат устойчив о ста реципиентам и являются мутантами лишь по одному гену. Ни у одного мутанта не изменено про­ никновение глифосат а в клетку и ни у одного не обнаружено ускорения реассоциации ДНК, свидетельствующего об амплификации гена, кодирующего мишень действия гли- фосата. Полученные мутации локализованы в четырех локусах хромосомы Е. coif, дале­ ко отстоящих друг от друга и от гена-мишени. Введение. Использование антиметаболитов — соединений, имитирую­ щих природные молекулы клетки, но химически от них отли.чающихся, дает возможность обнаружения особо активных веществ, способных избирательно изменить ход того или иного процесса в клетке и таким образом повлиять на ее жизнеспособность. В связи с этим они пред­ ставляют интерес как для научных исследований, так и различных прикладных областей — от сельского хозяйства до химиотерапии зло­ качественных заболеваний человека. Так, в настоящее время в сель­ ском хозяйстве успешно применяют гербициды нового поколения вы­ сокоизбирательного действия, которые являют собой аминокислотные антиметаболиты [1, 2]. В химиотерапии рака используется аналог предшественника синтеза ДНК 5-фторурацил, останавливающий про­ цесс репликации :[3], аналог эстрогена тамоксифен — в адъювантной терапии рака молочной железы [4]. Длительная практика целевого применения антиметаболитов показала, что часто эффективность их действия снижается из-за возникновения устойчивых клеток. В настоя­ щее время генетические механизмы такой устойчивости лучше всего изучены в случае аминокислотных антиметаболитов, в частности, ана­ лога глицина глифосата, использующегося как коммерческий герби­ цид раундап [1, 2]. Известно, что ген агоА, расположенный на 21-й мин карты хро­ мосомы Е. coli, кодирует один из ферментов шикиматного пути син­ теза, который и является мишенью действия глифосата [1, 2]. В слу­ чае амплификации либо мутирования этого гена в соответствующем месте, делающем мишень нечувствительной к данному ингибитору, клетка приобретает свойство глифосатустойчивости. Вероятность из­ менений в клетке по этому гену невысока (порядка 10~6). Вместе с тем, возможность возникновения клонов, устойчивых к глифосату, пос­ ле обработки клеток мутагеном составляет 10~~4 [12]. Означает ли это, что мутации и в каких-то других генах способны обусловить фенотип глифосатустойчивости? Возможность идентификации каждого гена ге­ нома клеток Е. coli позволяет ответить на этот волрос. Цель настоя­ щего исследования состояла в получении коллекции глифосатустойчи- вых мутантов, выявлении числа мутировавших генов и особенностей устойчивости к аналогам аминокислот, локализации этих генов в ге­ номе и установлении их рецессивно-доминантных отношений. © Е. И. ЧЕРЕПЕНКО, О. И. КАРПЕНКО, С. С. МАЛЮТА, 1994 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3—4 79 Материалы и методы. Ш т а м м ы б а к т е р и й и п л а з м и д ы . В работе использованы донорский и реципиентный штаммы процесса конъюгации: HfrC (прототроф) и AB1157F- thr-1,, Thi-1, lac y-1, mtl-1, ху15, galK2, pro A2 arg E3, str31, tsx33, sup 37, leu 6, ara, his 4G, по­ лученные от д-ра В. А. Ланцова (Ин-т ядер, исследований, Гатчина, Россия). В трансформационных опытах использовали штамм НВ101 и ллазмиду pUC19. Мутагенез донорских клеток HfrC in vivo с помощью N-метил-М- нитро-нитрозогуанидина (ННЖ) и конъюгационный перенос мутиро­ вавших генов в реципиентные клетки осуществляли классическими ме­ тодами [5]; селекцию глифосатустойчивых клеток — в условиях мини­ мальной среды, содержащей 0,5 мМ глифосат. (Использован препа­ рат, выпускаемый фирмой «Sigma» (США), а также коммерческий препарат, любезно предоставленный В. А. Швартау, Ин-т физиологии растений и генетики НАН Украины, Киев.) Опыты по измерению вхождения радиоактивных аминокислот в мутантные клетки проводили, как в работе [7]. Величины Coti/2 ДНК полученных глифосатустойчивых мутантов измеряли стандартным методом с помощью фракционирования одно- и двуцепочечных молекул ДНК с использованием центрифугирования кристаллов гидроксиапатита в 0,12 и 0,48 М Na-фосфатном буфере [8]. Клонирование фрагментов ДНК глифосатустойчивых мутантов, частично гидролизованной с помощью Sau3A и сшитой с векторной ДНК pUC 19 по BamHI-сайту, выполняли стандартно с использовани­ ем НВ101 клеток, высеваемых на минимальную среду с глифосатом с учетом всех ауксотрофных маркеров реципиента [9]. Результаты и обсуждение. Поскольку вероятность возникновения глифосатустойчивых клонов клеток Е. coli гораздо выше таковой му­ тирования гена агоА, нас привлекла возможность выявления числа ге­ нов, обусловливающих феноти.п такой устойчивости, и локализации этих генов в геноме, что особенно необходимо, если эти гены окажут­ ся по своей природе рецессивными. Для этого мы использовали метод прерываемого конъюгационного переноса генов из мутировавших кле­ ток донора, приобретших устойчивость к глифосату, в нормальные чувствительные клетки реципиента. Для удобства поиска генов, отли­ чающихся от агоАу мы выбрали в качестве донора штамм HfrC, у ко­ торого ген агоА расположен в самом конце участка переноса хромо­ сомы реципиентным клеткам. Клетки HfrC, стандартно обработанные ННЖ, высевали на мини­ мальные чашки, содержащие 0,5 мМ глифосат. Выросшие колонии ус­ тойчивых клеток пассировали трижды, чередуя селективные и, несе­ лективные условия. Таким образом была получена коллекция из 50 мутантов, устойчивых к глифосату. Мутанты не отличались по скорос­ ти роста в селективных и неселективных условиях, за исключением мутанта 7. При пассировании реверсии мутантов не обнаружено. При изучении особенности роста полученных мутантов на селек­ тивных средах, содержащих увеличивающиеся количества глифосата, было показано, что из 50 мутантов 40 выдерживали концентрации гли­ фосата, увеличенные по сравнению с концентрацией первичной селек­ ции в 2 раза, и 30 — даже в 3 раза. Для того чтобы проверить, не связан ли фенотип глифосатустой- чивости с неспособностью антиметаболита проникать в клетки мутант- ных клеток, мы изучили вхождение 14С-аланина в клетки мутантов в присутствии глифосата. Известно, что алани.н и глицин составляют од­ ну группу проникновения аминокислот в клетки Е. coli [6]. Если гли­ фосат как аналог глицина относится также к этой группе, то «холод­ ный» глифосат резко снизит радиоактивность клеток, контактирующих с 14С-аланином. Такой результат демонстрирует рис. 1. Поскольку гли­ фосат активно конкурировал с 14С-аланином и, следовательно, он со­ ставляет одну группу проникновения с этой аминокислотой, то анализ вхождения 14С-алани.на в клетки полученных глифосатустойчивых му- 80 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3 -4 тантов позволяет выявить мутанты по проникновению этого соединения в клетки. Когда мы сравнили величины радиоактивности клеток 50 по­ лученных глифосатустойчивых мутантов после их контакта с 14С-ала- нином в течение 0 и. 60 мин [7], то трехкратные измерения, проведен­ ные для каждого мутанта, не выявили мутантов, неспособных прово­ дить глифосат внутрь клеток. (Данные по измерению радиоактивнос­ ти клеток каждого мутанта не приводятся из-за их громоздкости.) Более того, оказалось, что среди полученных 50 глифосатустойчи­ вых мутантов 12 обладали способностью перекрестной устойчивости, /ОО/Омш/ го?вз/А О 20 40 мин Ж,Ж,4б fj^( Рис. 1. Влияние «холодного» глифосата на вхождение в клетки Е. coli 14С-ала.н<ина Р«е. 2. Локализация мутаций, сообщающих клеткам Е. coli глифосатустойчивость, на хромосомной карте (цифрами обозначены номера изученных глифосатустойчивых'му­ тантов) т. е. способностью роста клеток одновременно на аналогах различных аминокислот, а именно: 5-метилтриптофане (5 МТ), 5-2-амино-этил-Ь- цистеине (АЭЦ), фторфенилаланине (ФФе) в концентрациях 1 мМ. Чтобы определить, какое число генов, претерпевающих соответст­ вующую мутацию, отвечает за фенотип глифосатустойчивости и в ка­ ких местах генома располагаются такие гены, мы осуществили пере­ дачу признака глифосатустойчивости от полученных мутантов клеткам реципиента АВ 1157 в течение 5 ч конъюгации. Для всех 50 мутантов сравнивали выходы эксконъюгатов по двум маркерам — hisG4 и glyr: если число glyr эксконъюгатов сопоставимо с числом эксконъюгатов по одному гену hisG4, то ясно, что фенотип glyr связан с передачей лишь одного гена, несущего соответствующую мутацию. Изученные доноры по способности передачи этих двух маркеров распались на три группы: активной, умеренной и неактивной передачи. Это свидетельст­ вует о том, что у 36 ^уг-мутантов HfrC из полученных 50 передача признака глифосатустойчивости связана лишь с одним геном, и совре­ менные методы манипуляций с молекулами ДНК позволяют иденти­ фицировать каждый такой ген в клетках Е. coli. Что касается 14 мутантов, утративших свойство передачи хромо­ сомы, то у половины из них мы изучили скорость реассоциации ДНК и измерили процент ренатурации молекул ДНК при значении Coti/2, характерном для нормальных клеток Е. coli. Проводя эту работу, мы исходили из того, что если в изучаемых мутантах произошла ампли­ фикация по гену агоА, то процент ренатурации молекул ДНК при по­ добных значениях Coti/2 может быть выше, чем 50%, учитывая, что в процесс амплификации вовлекаются фрагменты размером 10— 20 тыс. п. н. и число копий амплифицированного материала составля­ ет 20—30 [10]. (Мы воспользовались показателем Coti/2 для изучения амплификации, влияющей на этот показатель, в связи с отсутствием: у нас зонда гена агоА.) Измерение скорости ренатурации ДНК изу­ чаемых глифосатустойчивых мутантов при значениях скорости Coti/2 ни в одном из случаев не выявило ускорения реассоциации, характер­ ного для генной амплификации, напротив, в случае мутанта 7 отме- ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3 - 4 81 чено замедление этого процесса. Таким образом, у 43 исследованных мутантов не наблюдалось генной амплификации, обусловливающей ус­ тойчивость к антиметаболиту. Обнаружив, что у 36 глифосатустойчивых мутантов донора HfrC признак глифосатустойчивости связан лишь с одним геном, мы про­ вели крупномасштабное картирование этих мутантов, разделив коль­ цевую карту хромосомы Е. coli на четыре сектора так, чтобы ген агоЛ в реципиентную клетку не передавался или передавался в последнюю очередь. На рис. 2 показана локализация мутаций, обусловливающих признак глифосатустойчивости клеток Е. coli. Из этого рисунка вид­ но, что изученные мутанты группируются по четырем локусам, три из них характеризуются приблизительно одинаковой представленностью, четвертый — «задевается» мутациями более редко. Ясно, что иденти­ фикация генов, лежащих в этих областях, и мутации в этих генах, при­ водящие к устойчивости клетки к глифосату, представляют интерес. В зависимости от природы указанных генов можно использовать два различных приема для их идентификации. Если, ген доминантен, мож­ но применять технику клонирования [9], если рецессивен, то следует, напротив, вводить в мутантные клетки фрагменты геномной ДНК с дикой аллелью такого гена, превращающей клетку из устойчивой сно­ ва в чувствительную [11]. В настоящее время мы продолжаем работу с отдельными мутантами, определяя доминантные и рецессивные ге­ ны, сообщающие клеткам фенотип глифосатустойчивости. Таким образом, генетическое изучение 50 glyr-MyTaHTOB, получен­ ных с помощью ННЖ, показало, что эта устойчивость наиболее веро­ ятно связана с мутированием лишь одного какого-то гена (у 36 мутан­ тов из 50) и такой ген может располагаться в четырех локусах генома Е. coli, картирующихся далеко друг от друга и от локуса гена агоАу кодирующего молекулу — мишень действия глифосата. В случае 43 мутантов не обнаружено явления генной амплификации, приводящей к антиметаболической устойчивости. Среди. 50 мутантов не выявлено ни одного с измененной способностью проводить глифосат внутрь клетки. О. Я. Черепенко, О. I. Карпенко, С. С. Малюта ГЕНЕТИЧН1 МЕХАН13МИ СТ1ИКОСТ1 КЛ1ТИН ESCHERICHIA COLI ДО АМШОКИСЛОТНИХ АНТИМЕТАБОЛ1Т1В. 1. ПОШУК ГЕН1В, В1ДМ1ННИХ В1Д MIUIEHI ДП ГЛ1ФОСАТУ Р е з ю м е Показано, що з 50 ппфосатспйких мутаитв, отримамих за допомогою Ынметил-Ы-шт- ро-штрозогуашдину, 36 передавали ознаку гл1фосатстшкосп рецишентам i e мутанта­ ми лише за одним геном. У жодаого з иих не зшнеиа цроникнють ттпфосату до кл1тл- ни i в жодного не виявлено прискорення реасощацп ДНК, яке б св^чило про амгш- фжащю гена, кодуючого мгшень дп пифосату. Одержан! мутацп локал1зоваш у чо- тирьох локусах хромосоми Е. coli, що знаходяться далеко один в1д одного i в1д гена MimeHi. Е. I. Cherepenko, О. I. Karpenko, S. S. Maluta GENETIC MECHANISMS OF ESCHERICHIA COLI CELL RESISTANCE TO AMINO ACID ANTIMETABOLITES. 1. SEARCH FOR GENES OTHER THAN GLYPHOSATE TARGET GENE S u m m a r y Conjugation donor Hfr С prototrophic cells were treated with NNG and glyphosate re­ sistant cells were selected. Out of 50 mutants obtained 36 transferred the trait of gly- phosate resistance to recipient cells showing that only a single gene was mutated. No changes in glyphosate penitration into mutant cells studied were shown. No changes in Coti/2 of mutant DNA were found which could be if pronounced ampltfication of aroA locus occurred. Mutants obtained were shown to be localized at 4 located far from each other and from aroA gene. 82 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИ МЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3 -4 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Kishore G., Shah D. Amino acid biosynthesis inhibitors as herbicides//Ann. Rev.. Biochem.—1988.—57.—P. 627—663. 2. Черепенко Е. И., Малюта С. С. О новых возможностях детоксикации гербицидов в растениях и окружающей среде//Успехи соврем, биологии.—1990.—110.— С. 46М— 474. 3. Rowledge Т. М. New directions for gene therapy//Science.—1993.—N 9.— 10.— P. 48a —48b. 4. Wolf D., Langan-Fahey S., Parker С et al. Investigation of the mechanism of tamo- xifen-stimulated breast tumor growth with nonisometrizable analogues of tamoxifen and metabolites//J. Nat. Cancer Inst.—1993.—85.—P. 806—812. 5. Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике.— М. : Мир, 1976.—436 с. 6. Lombardt F., Kaback H. Mechanisms of active transport in isolated bacterial mem­ brane vesicles//J. Biol. Ghem.— 1972.— 247.— P. 7844—7857. 7. Cosloy S. D.-Serine transfer system in E. coli K-12/ /J . Bacterid.— 1973.— 114.— P. 679—684. 8. Britten R., Graham D., Neufeld B. Analysis of repeating DNA sequences by reass(c|* ciation / / Meth. EnzymoL—1974.—29.— P. 363—418. 9. Маниатис Т., Фрин Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование.— М. : Мир, 1984.—443 с. 10. Tlsty Т., Albertini A., Miller J. Gene amplification in the Lac region of E. coli chro­ mosome / / Cell.—1984.—37.— P. 217—224. 11. Kohara Yu., Akiyama K., Isono K. The physical map of the whole E. coli chromoso­ me: application of a new strategy for rapid analysis and sorting of a large genomic library / / Cell.—1987.—50.— P. 495—508. 12. Comai L., Sen L., Stalker D. An altered aroA gene product confers resistance to the herbicide glyphosate//Science.—1983.—221.—P. 370—371. Ин-т молекуляр. биологии и генетики HAH Украины, Киев Получено 03.02.94 ISSN 0233-7657. БИОПОЛИМЕРЫ И КЛЕТКА. 1994. Т. 10. № 3—4 6* 83

Similar Items