Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом

Проведено изучение ответа лимфоидных клеток периферической крови 45 больных хроническим лимфолейкозом на действие ионизирующего излучения (ИИ). Изучали жизнеспособность клеток и экспрессию белков р53, р21 и MDM2, используя вестерн-блот анализ. У большей части больных (34 человека; 75,6%) выявлен нор...

Повний опис

Збережено в:

Бібліографічні деталі
Дата:	2008
Автори:	Абраменко, И.В., Завгородняя, А.В., Балан, В.И., Крячок, И.А., Чумак, А.А.
Формат:	Стаття
Мова:	Ukrainian
Опубліковано:	Iнститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького 2008
Теми:	Оригинальные исследования
Онлайн доступ:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/2346
Теги:	Додати тег Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:	Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом / И.В. Абраменко, А.В. Завгородняя, В.И. Балан, И.А. Крячок, А.А. Чумак // Онкологія. — 2008. — Т. 10, N 2. — С. 225-229. — Бібліогр.: 24 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-2346
record_format	dspace
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-23462025-02-09T09:51:07Z Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом Induction of p53-dependent apoptosis by ionizing radiation in lymphoid cells of patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia Абраменко, И.В. Завгородняя, А.В. Балан, В.И. Крячок, И.А. Чумак, А.А. Оригинальные исследования Проведено изучение ответа лимфоидных клеток периферической крови 45 больных хроническим лимфолейкозом на действие ионизирующего излучения (ИИ). Изучали жизнеспособность клеток и экспрессию белков р53, р21 и MDM2, используя вестерн-блот анализ. У большей части больных (34 человека; 75,6%) выявлен нормальный характер ответа на ИИ: нарастающая с течением времени гибель облученных клеток, индукция экспрессии белков р53 и р21, повышение базального уровня белка MDM2. У 11 больных (24,4%) найдены различные нарушения, связанные с функциональной некомпетентностью белка р53, что может усложнять проведение химиотерапевтического лечения таких пациентов. The response of peripheral blood lymphocytes from 45 patients with chronic lymphocytic leukemia (CLL) on ionizing radiation (IR) was evaluated. Cell viability and expression of some proteins (p53, p21, MDM2) by Western-blot analysis have been studied. The most of patients (34; 75.6%) showed typical response on IR: death of irradiated cells, induction of p53 and p21, increasing of basal level of MDM2 expression. Eleven patients (24.4%) had different disturbances in the system of p53-dependent apoptosis that might complicate treatment of such CLL patients. 2008 Article Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом / И.В. Абраменко, А.В. Завгородняя, В.И. Балан, И.А. Крячок, А.А. Чумак // Онкологія. — 2008. — Т. 10, N 2. — С. 225-229. — Бібліогр.: 24 назв. — рос. 1562-1774,0204-3564 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/2346 uk application/pdf Iнститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Ukrainian
topic	Оригинальные исследования Оригинальные исследования
spellingShingle	Оригинальные исследования Оригинальные исследования Абраменко, И.В. Завгородняя, А.В. Балан, В.И. Крячок, И.А. Чумак, А.А. Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом
description	Проведено изучение ответа лимфоидных клеток периферической крови 45 больных хроническим лимфолейкозом на действие ионизирующего излучения (ИИ). Изучали жизнеспособность клеток и экспрессию белков р53, р21 и MDM2, используя вестерн-блот анализ. У большей части больных (34 человека; 75,6%) выявлен нормальный характер ответа на ИИ: нарастающая с течением времени гибель облученных клеток, индукция экспрессии белков р53 и р21, повышение базального уровня белка MDM2. У 11 больных (24,4%) найдены различные нарушения, связанные с функциональной некомпетентностью белка р53, что может усложнять проведение химиотерапевтического лечения таких пациентов.
format	Article
author	Абраменко, И.В. Завгородняя, А.В. Балан, В.И. Крячок, И.А. Чумак, А.А.
author_facet	Абраменко, И.В. Завгородняя, А.В. Балан, В.И. Крячок, И.А. Чумак, А.А.
author_sort	Абраменко, И.В.
title	Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом
title_short	Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом
title_full	Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом
title_fullStr	Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом
title_full_unstemmed	Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом
title_sort	индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом
publisher	Iнститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р. Є. Кавецького
publishDate	2008
topic_facet	Оригинальные исследования
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/2346
citation_txt	Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом / И.В. Абраменко, А.В. Завгородняя, В.И. Балан, И.А. Крячок, А.А. Чумак // Онкологія. — 2008. — Т. 10, N 2. — С. 225-229. — Бібліогр.: 24 назв. — рос.
work_keys_str_mv	AT abramenkoiv indukciâp53zavisimogoapoptozapoddejstviemioniziruûŝegoizlučeniâvlimfoidnyhkletkahbolʹnyhvkletočnymhroničeskimlimfolejkozom AT zavgorodnââav indukciâp53zavisimogoapoptozapoddejstviemioniziruûŝegoizlučeniâvlimfoidnyhkletkahbolʹnyhvkletočnymhroničeskimlimfolejkozom AT balanvi indukciâp53zavisimogoapoptozapoddejstviemioniziruûŝegoizlučeniâvlimfoidnyhkletkahbolʹnyhvkletočnymhroničeskimlimfolejkozom AT krâčokia indukciâp53zavisimogoapoptozapoddejstviemioniziruûŝegoizlučeniâvlimfoidnyhkletkahbolʹnyhvkletočnymhroničeskimlimfolejkozom AT čumakaa indukciâp53zavisimogoapoptozapoddejstviemioniziruûŝegoizlučeniâvlimfoidnyhkletkahbolʹnyhvkletočnymhroničeskimlimfolejkozom AT abramenkoiv inductionofp53dependentapoptosisbyionizingradiationinlymphoidcellsofpatientswithbcellchroniclymphocyticleukemia AT zavgorodnââav inductionofp53dependentapoptosisbyionizingradiationinlymphoidcellsofpatientswithbcellchroniclymphocyticleukemia AT balanvi inductionofp53dependentapoptosisbyionizingradiationinlymphoidcellsofpatientswithbcellchroniclymphocyticleukemia AT krâčokia inductionofp53dependentapoptosisbyionizingradiationinlymphoidcellsofpatientswithbcellchroniclymphocyticleukemia AT čumakaa inductionofp53dependentapoptosisbyionizingradiationinlymphoidcellsofpatientswithbcellchroniclymphocyticleukemia
first_indexed	2025-11-25T13:36:29Z
last_indexed	2025-11-25T13:36:29Z
_version_	1849769637621792768
fulltext	ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 225О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8 ВВЕДЕНИЕ Важную роль в функционировании клеток игра- ет система репарации нуклеиновых кислот, которая активируется в ответ на повреждение геномной ДНК при действии различных генотоксических агентов, в том числе ионизирующего излучения (ИИ). Клю- чевыми ферментами для ее запуска являются вну- триядерные киназы — АТМ (ataxia-telangiectasia mutated), DNA-PK (DNA protein �inase) и A�� (atax-tein �inase) и A�� (atax- �inase) и A�� (atax-�inase) и A�� (atax-) и A�� (atax-A�� (atax- ia telangiectasia and �ad3-related protein), которые фосфорилируют различные белки, прежде всего бе- лок р53 [1]. Фосфорилированный р53 поступает в PML-тельца (внутриядерные образования, описан- ные у больных промиелоцитарным лейкозом), где вступает во взаимодействие с активатором транс- крипции СВР-PML, что вызывает ацетилирование р53 [2]. Такая посттрансляционная модификация белка удлиняет период его полураспада и приводит к накоплению р53 в ядре без существенного повы- шения уровня транскрипции, а также значительно повышает его активность как активатора экспрес- сии различных генов [3]. Мишенями р53 являются гены белков р21 (ингибитор циклинзависимой ки- назы) [4], BAX [5], BCL-2 [6]. Скоординированное функционирование этих и ряда других белков вызы- вает остановку клеточного цикла, что дает возмож- ность репарировать генетические повреждения, а при невозможности осуществить процессы репара- ции — индуцирует р53-зависимый апоптоз [7]. Способность к индукции р53-зависимого апоп- тоза во многом определяет поведение опухолевой клетки при различных видах новообразований [8]. Мутации гена р53 относятся к наиболее частым при опухолевом процессе. При хроническом лимфолей- козе (ХЛЛ) В-клеточной природы мутации гена р53 (делеция хромосомы р17), которые выявляются у 10–15% больных, являются самостоятельным не- гативным фактором прогноза заболевания [9]. По- мимо этого, у больных ХЛЛ дисфункцию р53 мо- гут вызвать делеции гена АТМ (делеции 11q22-23 хромосомы, отмечают у 5–8% больных), а также гипер экспрессия гена MDM2, что приводит к по- вышению содержания в клетке соответствующе- го белка, который взаимодействует с р53 и способ- ствует его убиквитинзависимой деградации в про- теосомах [10, 11]. Группой исследователей под руководством �. Stan�ovic [12] был предложен функциональ-12] был предложен функциональ- ный подход к исследованию нарушений в систе- ме р53-зависимого апоптоза у больных ХЛЛ. Он основывается на оценке жизнеспособности клеток и содержания внутриклеточных белков (р53, р21, MDM2) при воздействии ИИ. Нарушения в любом звене системы р53 приводит к развитию резистент- ности клеток к индукции апоптоза, а по характеру экспрессии отдельных белков можно установить уровень генетических нарушений. Цель настоящего исследования заключалась в из- учении частоты нарушений р53-зависимого апопто- за у больных ХЛЛ, находившихся на стационарном лечении в отделении гематологии и трансплантации костного мозга Научного центра радиационной ме- дицины АМН Украины, и оценке характера выяв- ленных нарушений. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Обследовано 45 больных В-ХЛЛ, 35 мужчин и 10 женщин в возрасте от 42 до 78 лет (средний воз- раст 56,1 + 8,8 года). Диагноз устанавливали на основании клинико-гематологических критериев ИНДУКЦИЯ p53-ЗАВИСИМОГО АПОПТОЗА ПОД ДЕЙСТВИЕМ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ В ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТКАХ БОЛЬНЫХ В-КЛЕТОЧНЫМ ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ Резюме. Проведено изучение ответа лимфоидных клеток периферической крови 45 больных хроническим лимфолейкозом на действие ионизирующего излучения (ИИ). Изучали жизнеспособность клеток и экспрессию белков р53, р21 и MDM2, используя вестерн-блот анализ. У большей части больных (34 человека; 75,6%) выявлен нормальный характер ответа на ИИ: нарастающая с течением време- ни гибель облученных клеток, индукция экспрессии белков р53 и р21, повышение базального уровня белка MDM2. У 11 больных (24,4%) найдены различные нару- шения, связанные с функцио нальной некомпетентностью белка р53, что может усложнять проведение химиотерапевтического лечения таких пациентов. И.В. Абраменко А.В. Завгородняя В.И. Балан И.А. Крячок А.А. Чумак Научный центр радиационной медицины АМН Украины, Киев, Украина Ключевые слова: хронический лимфолейкоз, ионизирующее излучение, p53-зависимый апоптоз, вестерн-блот анализ ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 226 О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8 [13–15] и иммунофенотипирования лимфоцитов периферической крови. В исследование взяты па- циенты с содержанием субстратных лимфоидных клеток (CD5+CD20+CD23+HLA-D�+CD22low) в пе- риферической крови не менее 80%. Полученные мононуклеары перифериче- ской крови культивировали на протяжении ночи при 37 °C в атмосфере 5% CO2 в питательной среде �PMI с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, L-глютамина, пенициллина и стрептомицина. Облучали опытные культуры в дозе 5 Гр в течение 110 с с помощью источника цезий-137 (аппарат для облучения препаратов крови IBL437C CIS Bio International, Франция), продолжали культивирование в тех же условиях и оценивали жиз-условиях и оценивали жиз- неспособность клеток через 24, 48 и 72 ч методом окрашивания трипановым синим. Через 10 ч после облучения часть клеток (2 x 106) лизировали для по- следующего вестерн-блот анализа. Лизис проводи- ли в течение 30 мин в холодном литическом буфере, содержащем 25 мM �ris HCl, pH 7,5; 5 мM ED�A, 1 мM PMSF, 100 мкг/мл апротинина, 200 мкг/мл леупептина, 50 мM NaF, (Sigma, Германия) и 1% детергента NP-40. Супернатант центрифугировали при 15 000 об./мин в течение 15 мин при темпера- туре 9 °C. Полученные экстракты ресуспендировали в равном объеме 2-кратного буфера для электрофо- реза, прогревали на водяной бане и проводили вер- тикальный электрофорез в 5% полиакриламидном геле по Laemmli [16]. После переноса белков на ни- троцеллюлозную мембрану определеляли экспрес- сию белков методом вестерн-блот анализа и уси- ленной хемилюминесценции (ECL). Использова- ли следующие моноклональные антитела (МкАТ): анти-MDM2 (клон HMDM2-323), анти-р21 (клон СР74), анти-р53 (клон Р5813), а также кроличьи антитела против фосфорилированного р53 (все ре- агенты производства «Sigma», США). Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы SPSS 13.0 (SPSS, США). РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Большая часть опухолевых В-лимфоцитов пери- ферической крови у больных ХЛЛ, как известно, на- ходится в фазе покоя G0 и резистентна к митоген- ной стимуляции [17]. Поэтому при оценке клеточ- ного ответа на действие ИИ мы ориентировались на количество погибших клеток, а не на показате- ли задержки клеточного цикла. В контрольных необлученных культурах мор- фологическая характеристика клеток существенно не менялась, а число погибших клеток достовер- но не различалось в различные сроки наблюдения (p > 0,05). Клеточный субстрат был представлен в основном лимфоцитами малого и среднего размера. После облучения, начиная с 24 ч после начала опы- та, в культурах появлялись клетки с фрагментацией ядра, зернистостью в цитоплазме (остатки ядерной субстанции), апоптотические тельца. Одновременно возрастало количество погибших клеток, что уста- навливали по их окраске трипановым синим. Раз- ница между числом погибших клеток в контрольных и опытных культурах была достоверной (p < 0,001) во все сроки наблюдения (рис. 1). Рис. 1. Жизнеспособность лимфоидных клеток больных В-ХЛЛ в различные сроки после воздействия ИИ (опыт) по сравнению с необлученными культурами (контроль) Для каждого из больных рассчитывали вероятность различий в жизнеспособности клеток в контрольных и опытных культурах по критерию χ2 (таблица). Для большинства обследованных больных (34 человека; 75,6%) эти различия были достоверными (p < 0,001). Таблица Жизнеспособность клеток в контрольных и облученных культурах клеток больных ХЛЛ в зависимости от достоверности различий при парном сравнении Вр ем я по сл е об лу че ни я, ч Различия досто- верны (n = 34) Различия недосто- верны из-за высо- кой гибели клеток в контрольных куль- турах (n = 7) Различия недо- стоверны из-за резистентности клеток к индукции апоптоза (n = 4) Контроль Опыт Контроль Опыт Контроль Опыт 24 8,71 ± 1,66 21,34 ± 3,36 27,17 ± 5,86 33,83 ± 8,17 7,95 ± 1,48 9,15 ± 1,71 48 14,96 ± 1,74 32,79 ± 3,13 30,05 ± 5,07 36,75 ± 5,89 5,76 ± 1,13 2,04 ± 0,67 72 17,68 ± 1,86 36,98 ± 2,26 31,23 ± 4,35 38,11 ± 5,04 6,45 ± 1,78 5,38 ± 1,47 У 4 больных (8,9%) клетки оставались резистент- ными к индукции апоптоза, и число погибших кле- ток было низким как в контроле, так и в опыте, при- чем на протяжении эксперимента оно достоверно не изменялось. Еще у 7 больных (15,5%) процент по- гибших клеток был одинаково высоким как в кон- троле, так и при воздействии ИИ. Таким образом, у 34 больных отмечали адекватный (нормальный) клеточный ответ на облучение, тогда как у 11 боль- ных он был нарушен (атипичный ответ). Исследование экспрессии белков проводили в лизатах клеток через 10 ч после облучения, когда индукция р53 достигает максимума [3]. У больных с нормальным характером клеточного ответа на облучение экспрессия фосфорилирован- ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 227О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8 ного и нефосфорилированного р53 в клетках кон- трольных культур не определялась, но появлялась после облучения (рис. 2). Рис. 2. Результаты исследования экспрессии фосфори- лированного белка р53 в клеточных лизатах при помо- щи вестерн-блот анализа. Дорожки 1, 3, 5 — лизаты кон- трольных клеток. Дорожки 2, 4, 6 — лизаты клеток через 10 ч после облучения Результатом активности р53 как фактора транс- крипции является индукция экспрессии ряда генов-мишеней. Мы проводили определение бел- кового продукта одного из них, а именно белка р21. Он принимает участие в регуляции клеточного цик- ла, которая во многом определяется присутствием спефицических белков — циклинов. Циклины об- разуют комплексы с циклинзависимыми киназами (Cd�), в составе которых выполняют регуляторную функцию, а киназы — ферментативную. Клеточ- ный цикл связан с последовательной активацией различных Cd�. Их активность проявляется в ком- плексе с циклинами, а также регулируется низко- молекулярными ингибиторами, к которым отно- сится и белок р21. р21 входит в состав семейства р21WAF1/Clip1 и принимает участие в угнетении пере- хода клетки из фазы G1 в фазу S. Белок р21 свя- зывается с комплексами циклин Е/Cd�2, циклин D/Cd�4 и циклин А/Cd�2. Кроме того, р21 угнета- ет функцию ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA) и белка �b, необходимого для про- лиферации клеток [18]. У больных с адекватным клеточным ответом на облучение экспрессия р21 не отличалась от характера экспрессии р53: отсутствовала в контрольных клетках и появлялась после воздействия ИИ (рис. 3). Рис. 3. Результаты определения экспрессии белка р21 в клеточных лизатах при помощи вестерн-блот анализа. До- рожки 1, 3, 5 — лизаты контрольных клеток. Дорожки 2, 4, 6 — лизаты клеток через 10 ч после облучения В подгруппе больных с отсутствием индукции апоптоза под действием ИИ (4 человека) выявлено 2 типа экспрессии исследуемых белков. У 2 больных белки р53 и р21 отсутствовали в контрольных куль- турах и не индуцировались в опытных. В данном случае можно предположить наличие делеции 17р хромосомы с инактивацией второй аллели гена р53 или менее вероятно — мутаций гена АТМ, наруша- ющих его киназную активность [19]. Еще у 2 боль- ных выявлена гиперэкспрессия белка р53 как в кон- троле, так и в опыте (рис. 4). Рис. 4. Результаты определения экспрессии белка р53 в клеточных лизатах при помощи вестерн-блот анализа. Дорожки 1, 3 — лизаты контрольных клеток. Дорожки 2, 4 — лизаты клеток через 10 ч после облучения Это свидетельствует об увеличении периода по- лураспада р53 в результате мутаций, которые нару- шают конформационную структуру белка [20]. Кро- ме того, у этих больных не произошла индукция р21 (белок не выявлен в контрольных или опытных культурах клеток). Это связано с тем, что мутантный белок, хотя он и присутствует в значительном коли- честве, не может регулировать экспрессию генов- мишеней, так как утрачивает способность связы- ваться со специфическими последовательностями в составе ДНК [20]. Наиболее гетерогенным был характер экспрес- сии белков в подгруппе больных с нарушенным кле- точным ответом на действие ИИ вследствие повы- шенной клеточной гибели в контрольных культурах (7 человек). В 2 случаях полученные данные свиде- тельствовали о наличии мутаций гена р53 — гипер- экспрессия белка р53 в контроле, отсутствие индук- ции р21. У 5 больных белки р53 и р21 отсутствовали в контроле, после облучения отмечали слабую экс- прессию белка р53, белок р21 в виде слабой полосы был выявлен только у 3 из них, а в 2 случаях не ин- дуцировался. Предположительно такой тип отве- та может быть связан со снижением функциональ- ной активности белка АТМ. Так, снижение уровня белка АТМ выявили в опухолевых клетках 30–40% больных ХЛЛ [21, 22], причем у части больных от- мечали мутации гена [23]. Как уже отмечалось выше, белок MDM2 может выступать как негативный регулятор функции р53. MDM2 связывается с р53 в консервативной области (аминокислотные остатки 17–27) и способствует пе- реходу последнего из ядра в цитоплазму, где белок р53 подвергается деградации [11]. В нашем исследовании экспрессия MDM2 была выявлена как в контрольных, так и в облученных клетках всех больных приблизи- тельно на одинаковом уровне, хотя и была несколько выше в лизатах облученных клеток у больных с адек- ватным клеточным ответом на облучение (рис. 5). Рис. 5. Результаты определения экспрессии белка MDM2 в клеточных лизатах при помощи вестерн-блот анализа. Дорожки 1, 3 — лизаты контрольных клеток. Дорожки 2, 4 — лизаты клеток через 10 ч после облучения Возможно, это связано с тем, что белок р53 яв- ляется активатором экспрессии MDM2 [24]. Одна- ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 228 О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8 ко ни у одного из больных, независимо от характера клеточного ответа на облучение, не выявлено гипер- экспрессии этого белка и, следовательно, возмож- ного влияния MDM2 на изменение чувствительно- сти к индукции р53-зависимого апоптоза. ВЫВОДЫ Таким образом, в результате проведенных иссле- дований вывлены следуюшие типы клеточного от- вета на действие ИИ: 1. Адекватный характер клеточного ответа, вы- явленный у большинства обследованных больных (75,6%). Характеризуется нарастающей с течением времени гибелью облученных клеток, индукцией в них экспрессии белков р53 и р21, повышением ба- зального уровня белка MDM2. 2. Атипичный характер ответа, связанный ско- рее всего с мутациями р53 (с или без делеции второй аллели); характеризуется отсутствием достоверной разницы в количестве погибших клеток в контроль- ных и облученных культурах, высоким базальным уровнем р53, отсутствием индукции р21. Выявлен у 4 больных (8,9%). 3. Атипичный характер ответа, вероятнее все- го связанный с делециями гена р53 (делеции 17р) с инактивацией второй аллели: резистентность к ин- дукции ИИ-опосредованного апоптоза, отсутствие экспрессии р53 и р21 в контроле и после облучения. Выявлен у 2 больных (4,4%). 4. Атипичный характер ответа, возможно свя- занный с нарушениями гена АТМ: отсутствие до- стоверной разницы в количестве погибших клеток в контрольных и облученных культурах, слабая ин- дукция р53, р21 или ее отсутствие под влиянием об- лучения. Выявлен у 5 больных (11,1%). Полученные данные свидетельствуют, что в груп- пе больных ХЛЛ, нуждающихся в проведении стаци- онарного лечения, достаточно часто, примерно в 25% случаев, отмечают различные аномалии в системе ин- дукции р53-зависимого апоптоза. Учитывая тот факт, что многие химиотерапевтические средства, приме- няемые для лечения ХЛЛ, в том числе и флударабин, вызывают именно р53-зависимый апоптоз [24], мож- но предположить у таких больных отсутствие пози- тивного ответа (или недостаточно эффективный устойчивый ответ) на проводимую терапию. ЛИТЕРАТУРА 1. Zakian VA. A�M-related genes: whay do they tell us about functions of the human gene? Cell 1995; 82: 685–7. 2. Kastan MB, Onyekwere O, Sidransky D, et al. Participation of p53 protein in the cellular response to DNA damage. Cancer �es 1991; 51: 6301–11. 3. Fritsche M, Haessler C, Brandner G. Induction of nuclear accumulation of the tumour suppressor protein p53 by DNA- damaging agents. Oncogene 1993; 8: 307–18. 4. El-Deiry WS, Tokino T, Velculescu VE, et al. WAF1, a potential mediator of p53 tumour suppression. Cell 1993; 75: 817–25. 5. Miyashita T, Reed J. �umour suppressor p53 is a direct transcriptional activator of the human bax gene. Cell 1995; 80: 293–9. 6. Miyashita T, Harigai M, Hanada M, Reed JC. Identification of a p53-dependent negative response element in the bcl-2 gene. Cancer �es 1994; 54: 3131–5. 7. Carbone R, Pearson M, Minucci S, Pelicci RG. PML NBs associate with the hMre11 complex and p53 at sites of irradiation induced DNA damage. Oncogene 2002; 21: 1633–40. 8. Lane DP. p53 and human cancers. Brit Med Bull 1994; 50: 582–99. 9. Dewald GW, Brockman SR, Paternoster SF, et al. Chromosome anomalies detected by interphase fluorescence in situ hybridization: correlation with significant biological features of B-cell chronic lymphocytic leu�aemia. Brit J Haematol 2003; 121: 287–95. 10. Dohner H, Stilgenbauer S, James MR, et al. 11q deletions identify a new subset of B-cell chronic lymphocytic leu�emia characterized by extensive nodal involvement and inferior prognosis. Blood 1997; 89: 2516–22. 11. Prives C. Signaling to p53: brea�ing the MDM2-p533 circuit. Cell 1998; 98: 5–8. 12. Pettitt ER, Sherrington PD, Stewart G, et al. p53 dysfunction in B-cell chronic lymphocytic leu�emia: inactivation of A�M as an alternative to �P53 mutation. Blood 2001; 98: 814–22. 13. Rai KR, Sawitzky A, Cronkite EP, et al. Clinical staging of chronic lymphocytic leu�emia. Blood 1975; 46: 219–24. 14. Binet JL, Auguier A, Dighiero G, et al. A new prognostic classification of chronic lymphocytic leu�emia derived from a multivariante survival analysis. Cancer 1981; 48: 198–205. 15. International Wor�shop on Chronic Lymphocytic Leu�emia. Chronic lymphocytic leu�emia: recommendations for diagnosis, staging, and response criteria. Ann Intern Med 1989; 110: 236–8. 16. Work TS, Work E. Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology. Vol 1, part 1. North Holland Publishing Co, 1969: 320 p. 17. Reed JC. Molecular biology of chronic lymphocytic leu�emia. Semin Oncol 1998; 25: 11–8. 18. Dulic V, Lees E, Reed SI. Association of human cyclin E with periodic G1-S phase protein �inase. Science 1992; 257: 1958–61. 19. Stankovic T, Stewart GS, Fegan Ch, et al. Ataxia telangiectasia mutated-deficient B-cell chronic lymphocytic leu�emia occurs in pregerminal center cells and results in defective damage response and unrepaired chromosome damage. Blood 2002; 99: 300–9. 20. Prives C. How loops, β sheets, and α helices help us to understand p53. Cell 1994; 78: 543–6. 21. Starostik P, Manshouri T, O’Brien S, et al. Deficiency of the A�M protein expression defines an aggressive subgroup of B-cell chronic lymphocytic leu�emia. Cancer �es 1998; 58: 4552–7. 22. Stankovic T, Weber P, Stewart G, et al. Inactivation of ataxia telangiectasia mutated gene in B-cell chronic lymphocytic leu�aemia. Lancet 1999; 353: 26–9. 23. Schaffner C, Stilgenbauer S, Rappold GA, et al. Somatic A�M mutations indicate a pathogenic role of A�M in B-cell chronic lymphocytic leu�emia. Blood 1999; 94: 748–53. 24. Rosenwald A, Chuang E, Davis R, et al. Fludarabine treatment of patients with chronic lymphocytic leu�emia induces a p53-dependent gene expression response. Blood 2004; 104: 1428–34. ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 229О Н К О Л О Г И Я • Т. 1 0 • № 2 • 2 0 0 8 INDUCTION OF p53-DEPENDENT APOPTOSIS BY IONIZING RADIATION IN LYMPHOID CELLS OF PATIENTS WITH B-CELL CHRONIC LYMPHOCYTIC LEUKEMIA I.V. Abramenko, А.V. Zavgorodnyaya, V.I. Balan, I.А. Kryachouk, А.А. Chumak Summary. The response of peripheral blood lymphocytes from 45 patients with chronic lymphocytic leukemia (CLL) on ionizing radiation (IR) was evaluated. Cell viability and expression of some proteins (p53, p21, MDM2) by Western-blot analysis have been studied. The most of patients (34; 75.6%) showed typical response on IR: death of irradiated cells, induction of p53 and p21, increasing of basal level of MDM2 expression. Eleven patients (24.4%) had different disturbances in the system of p53-dependent apoptosis that might complicate treatment of such CLL patients. Key Words: chronic lymphocytic leu�emia, ionizing radiation, p53-dependent apoptosis, Western-blot analysis. Адрес для переписки: Абраменко И.В. 03115, Киев, просп. Победы, 119/121 Научный центр радиационной медицины АМН Украины

Индукция p53-зависимого апоптоза под действием ионизирующего излучения в лимфоидных клетках больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом

Репозитарії

Схожі ресурси