Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii
Проведено сравнительное изучение влияния режимов охлаждения и состава консервирующих сред на свободные и иммобилизованные на энтеросорбентах клетки пробиотика Saccharomyces boulardii. Установлена более высокая жизнеспособность свободных клеток дрожжей при всех режимах криоконсервирования. Сохранност...
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Date: | 2012 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68475 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii / И.П. Высеканцев, О.М. Бабинец, В.Ф. Марценюк, Т.М. Гурина // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 1. — С. 21-29. — Бібліогр.: 19 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68475 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Высеканцев, И.П. Бабинец, О.М. Марценюк, В.Ф. Гурина, Т.М. 2014-09-25T04:47:31Z 2014-09-25T04:47:31Z 2012 Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii / И.П. Высеканцев, О.М. Бабинец, В.Ф. Марценюк, Т.М. Гурина // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 1. — С. 21-29. — Бібліогр.: 19 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68475 57.043:579.61 Проведено сравнительное изучение влияния режимов охлаждения и состава консервирующих сред на свободные и иммобилизованные на энтеросорбентах клетки пробиотика Saccharomyces boulardii. Установлена более высокая жизнеспособность свободных клеток дрожжей при всех режимах криоконсервирования. Сохранность комплексов "носитель-клетки" была значительно ниже. Охлаждение со скоростью 1 град/мин обеспечивает максимальную жизнеспособность свободных и иммобилизованных клеток. Проведено порівняльне вивчення впливу режимів охолодження і складу консервуючих середовищ на вільні та іммобілізовані на ентеросорбентах клітини пробіотика Saccharomyces boulardii. Встановлена більш висока життєздатність вільних клітин дріжджів при всіх режимах кріоконсервування. Збереженість комплексів «носій-клітини» була значно нижчою. Охолодження зі швидкістю 1 град/хв забезпечує максимальну життєздатність вільних і іммобілізованих клітин. The influence of cooling regimens and preserving media composition on Saccharomyces boulardii probiotic free cells and those immobilized on enterosorbents, was comparatively studied. The preservation of higher viability of free yeast cells was established after application of all the cryopreservation regimens. The viability of ‘carrier-cells’ complexes was much lower. Cooling with 1 degree/min rate provided the maximum viability for free and immobilized cells. Авторы выражают глубокую благодарность к.б.н. Ю.А. Петренко за ценные замечания. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Теоретическая и экспериментальная криобиология Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii Comparative Study of Influence of Cryopreservation Regimens on Free and Immobilized Cells of Saccharomyces boulardii Probiotic Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii |
| spellingShingle |
Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii Высеканцев, И.П. Бабинец, О.М. Марценюк, В.Ф. Гурина, Т.М. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title_short |
Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii |
| title_full |
Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii |
| title_fullStr |
Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii |
| title_full_unstemmed |
Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii |
| title_sort |
сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика saccharomyces boulardii |
| author |
Высеканцев, И.П. Бабинец, О.М. Марценюк, В.Ф. Гурина, Т.М. |
| author_facet |
Высеканцев, И.П. Бабинец, О.М. Марценюк, В.Ф. Гурина, Т.М. |
| topic |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet |
Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| publishDate |
2012 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Comparative Study of Influence of Cryopreservation Regimens on Free and Immobilized Cells of Saccharomyces boulardii Probiotic |
| description |
Проведено сравнительное изучение влияния режимов охлаждения и состава консервирующих сред на свободные и иммобилизованные на энтеросорбентах клетки пробиотика Saccharomyces boulardii. Установлена более высокая жизнеспособность свободных клеток дрожжей при всех режимах криоконсервирования. Сохранность комплексов "носитель-клетки" была значительно ниже. Охлаждение со скоростью 1 град/мин обеспечивает максимальную жизнеспособность свободных и иммобилизованных клеток.
Проведено порівняльне вивчення впливу режимів охолодження і складу консервуючих середовищ на вільні та іммобілізовані на ентеросорбентах клітини пробіотика Saccharomyces boulardii. Встановлена більш висока життєздатність вільних клітин дріжджів при всіх режимах кріоконсервування. Збереженість комплексів «носій-клітини» була значно нижчою. Охолодження зі швидкістю 1 град/хв забезпечує максимальну життєздатність вільних і іммобілізованих клітин.
The influence of cooling regimens and preserving media composition on Saccharomyces boulardii probiotic free cells and those immobilized on enterosorbents, was comparatively studied. The preservation of higher viability of free yeast cells was established after application of all the cryopreservation regimens. The viability of ‘carrier-cells’ complexes was much lower. Cooling with 1 degree/min rate provided the maximum viability for free and immobilized cells.
|
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68475 |
| citation_txt |
Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика Saccharomyces boulardii / И.П. Высеканцев, О.М. Бабинец, В.Ф. Марценюк, Т.М. Гурина // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 1. — С. 21-29. — Бібліогр.: 19 назв. — рос., англ. |
| work_keys_str_mv |
AT vysekancevip sravnitelʹnoeizučenievliâniârežimovkriokonservirovaniânasvobodnyeiimmobilizovannyekletkiprobiotikasaccharomycesboulardii AT babinecom sravnitelʹnoeizučenievliâniârežimovkriokonservirovaniânasvobodnyeiimmobilizovannyekletkiprobiotikasaccharomycesboulardii AT marcenûkvf sravnitelʹnoeizučenievliâniârežimovkriokonservirovaniânasvobodnyeiimmobilizovannyekletkiprobiotikasaccharomycesboulardii AT gurinatm sravnitelʹnoeizučenievliâniârežimovkriokonservirovaniânasvobodnyeiimmobilizovannyekletkiprobiotikasaccharomycesboulardii AT vysekancevip comparativestudyofinfluenceofcryopreservationregimensonfreeandimmobilizedcellsofsaccharomycesboulardiiprobiotic AT babinecom comparativestudyofinfluenceofcryopreservationregimensonfreeandimmobilizedcellsofsaccharomycesboulardiiprobiotic AT marcenûkvf comparativestudyofinfluenceofcryopreservationregimensonfreeandimmobilizedcellsofsaccharomycesboulardiiprobiotic AT gurinatm comparativestudyofinfluenceofcryopreservationregimensonfreeandimmobilizedcellsofsaccharomycesboulardiiprobiotic |
| first_indexed |
2025-11-27T05:30:26Z |
| last_indexed |
2025-11-27T05:30:26Z |
| _version_ |
1850798473180348416 |
| fulltext |
21
Вследствие современного ритма и условий жиз-
ни человека развиваются так называемые болезни
цивилизации, одной из которых является дисбиоз
кишечника – клинико-лабораторный синдром, свя-
занный с изменением качественного и/или коли-
чественного состава микробиоценоза, трансло-
кацией различных его представителей в несвойст-
венные биотопы, метаболическими и иммунными
нарушениями, сопровождающимися у части па-
циентов клиническими симптомами [10].
Важным звеном в лечении дисбиоза является
использование пробиотиков и энтеросорбентов [8].
Применение пробиотиков обусловлено их защит-
ным действием по отношению к чужеродной пато-
генной и условно-патогенной микрофлоре за счет
различных механизмов. Они прямо конкурируют
с ней за питательные субстраты и сайты адгезии,
продуцируют соединения, подавляющие ее рост
(перекись водорода, короткоцепочечные жирные
кислоты, молочную кислоту, пироглютамат). Мно-
гие штаммы пробиотиков вырабатывают бакте-
риоцины – антибактериальные вещества, которые
Due to an contemporary life rhythm and conditions
the human suffers from so-called civilization diseases,
one of which is intestinal dysbiosis, representing a cli-
nical and laboratory syndrome, associated to a changed
qualitative and/or quantitative composition of micro-
biocenosis, translocation of its different representatives
into unusual biotopes, metabolic and immune disorders,
accompanied by clinical symptoms in some patients
[10].
An important link in dysbiosis treatment is the use
of probiotics and enterosorbents [8]. The application
of probiotics is stipulated by their protective effect
against the foreign pathogenic and opportunistic patho-
genic microflora by involving different mechanisms.
They are in a direct competition for nutrient substrates
and adhesive sites, produce substances, which suppress
pathogenic development (oxygen peroxide, short-chain
fatty acids, lactic acid, pyroglutamate). Many probiotic
strains produce bacteriocins, i. e. antibacterial sub-
stances, supressing growth of other microbes as well.
This ability is highly inherent to representatives of Ente-
rococcus and Lactobacterium genera. Probiotics cau-
УДК 57.043:579.61
И.П. ВЫСЕКАНЦЕВ*, О.М. БАБИНЕЦ, В.Ф. МАРЦЕНЮК, Т.М. ГУРИНА
Сравнительное изучение влияния режимов криоконсервирования
на свободные и иммобилизованные клетки пробиотика
Saccharomyces boulardii
UDC 57.043:579.61
I.P. VYSEKANTSEV*, O.M. BABINETS, V.F. MARTSENYUK, T.M. GURINA
Comparative Study of Influence of Cryopreservation Regimens on Free
and Immobilized Cells of Saccharomyces boulardii Probiotic
Проведено сравнительное изучение влияния режимов охлаждения и состава консервирующих сред на свободные и
иммобилизованные на энтеросорбентах клетки пробиотика Saccharomyces boulardii. Установлено более высокую
жизнеспособность свободных клеток дрожжей при всех режимах криоконсервирования. Сохранность комплексов «носитель-
клетки» была значительно ниже. Охлаждение со скоростью 1 град/мин обеспечивает максимальную жизнеспособность свободных
и иммобилизованных клеток.
Ключевые слова: пробиотики, криоконсервирование, иммобилизация на энтеросорбентах.
Проведено порівняльне вивчення впливу режимів охолодження і складу консервуючих середовищ на вільні та іммобілізовані
на ентеросорбентах клітини пробіотика Saccharomyces boulardii. Встановлена більш висока життєздатність вільних клітин
дріжджів при всіх режимах кріоконсервування. Збереженість комплексів «носій-клітини» була значно нижчою. Охолодження
зі швидкістю 1 град/хв забезпечує максимальну життєздатність вільних і іммобілізованих клітин.
Ключові слова: пробіотики, кріоконсервування, іммобілізація на ентеросорбентах.
The influence of cooling regimens and preserving media composition on Saccharomyces boulardii probiotic free cells and those
immobilized on enterosorbents, was comparatively studied. The preservation of higher viability of free yeast cells was established
after application of all the cryopreservation regimens. The viability of ‘carrier-cells’ complexes was much lower. Cooling with
1 degree/min rate provided the maximum viability for free and immobilized cells.
Key words: probiotics, cryopreservation, immobilization on enterosorbents.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.: (+38
057) 373-31-26, факс: (+38 057) 373-30-84, электронная почта:
vysekantsev49@mail.ru
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373 31
26, fax: +380 57 373 3084, e-mail: vysekantsev49@mail.ru
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
22
также угнетают рост других микробов. Этой спо-
собностью в высокой степени обладают предста-
вители родов Enterococcus и Lactobacterium. Про-
биотики оказывают также прямое антитоксичес-
кое действие – нейтрализуют цито- и энтероток-
сины вирусов и бактерий. Так, в исследовании
D. Czerucka [14] было показано уменьшение сек-
реции натрия и воды, а также снижение образова-
ния цАМФ в кишечнике больных острой инфекцион-
ной диареей после приема S. boulardii. Наиболее
сильное прямое антимикробное и антитоксическое
действие было выявлено у конкурентных пробио-
тиков S. boulardii и Вacillus subtilis [19]. Адгезия
к кишечному эпителию – одно из важнейших
свойств пробиотиков. Они присоединяются к эпи-
телию с помощью гликоконъюгированных рецеп-
торов, обеспечивают колонизационную резистент-
ность, препятствуют адгезии и инвазии патогенов.
На культуре колоноцитов Сасо2 [13] было показано,
что живые штаммы пробиотиков адгезируют к эпи-
телию и тем самым: укрепляют цитоскелет интес-
тинальных эпителиоцитов (усиливаются экспрес-
сия тропомиозина ТМ-5, синтез актина и окклюзи-
на); уменьшают проницаемость (повышается фос-
форилирование белков межклеточных соединений);
повышают синтез муцина (стимуляция гена muc-3);
стимулируют синтез и активацию рецептора эпи-
телиального фактора роста и увеличивают синтез
гормоноподобных веществ – полиаминов, которые
усиливают процесс регенерации эпителия.
Вышеописанные механизмы способствуют по-
вышению защитных свойств кишечного эпителия.
Помимо защитных свойств пробиотики выполняют
дигестивную функцию [10].
На современном фармацевтическом рынке пред-
ставлены различные коммерческие формы препа-
ратов пробиотиков: сухие, изготовленные способом
тепловой сушки или лиофилизации, а также жидкие –
в ростовой или защитной среде [11, 12, 18].
При разработке новых форм иммунобиологи-
ческих препаратов и биологически активных доба-
вок особое внимание уделяется иммобилизован-
ным на/в различных носителях препаратам микро-
организмов и их метаболитов. Поскольку пробиоти-
ки и энтеросорбенты являются важным звеном в
терапии дисбиоза, мы провели исследования по
созданию препаратов пробиотиков, иммобилизо-
ванных на углеродсодержащих энтеросорбентах [4,
5] .
Иммобилизация на энтеросорбентах показана
прежде всего для пробиотиков, обладающих сла-
бой способностью к колонизации кишечника чело-
века, например дрожжей S. boulardii, на основе кото-
рых создан препарат «Энтерол». Установлено, что
при экспериментальном антибиотико-ассоциирован-
ном и иммуносупрессивном дисбиозе иммобилизо-
se also a direct antitoxic effect: they neutralize the vi-
ral and bacterial cyto- and enterotoxins. For example,
Czerucka D. [14] demonstrated the reduction of potas-
sium and water secretion, as well as a decrease in
cAMP formation in intestine of patients with acute
inflectional diarrhea after S. boulardii intake. The
strongest direct anti-microbial and antitoxic effect was
revealed in competitive probiotics S. boulardii and
Вacillus subtilis [19]. One of the most important pro-
perties of probiotics is their adhesion to intestinal epi-
thelium. They attach to epithelium by means of
glycoconjugated receptors, provide a colonizational re-
sistance, and prevent the adhesion and invasion of
pathogens. In the Caco2 colonocyte culture [13] the
alive probiotic strains were shown as adhering to epi-
thelium, thereby strengthening the cytoskeleton of in-
testinal epithelial cells (intensified expression of tropo-
miosine TM-5, actin and occlusin synthesis); reducing
the permeability (increased protein phosphorylation of
intercellular substances); increasing mucin synthesis
(muc-3 gene stimulation); stimulating synthesis and
activation of epithelial growth factor receptor and
augmenting synthesis of hormone-like substances, poly-
amines, which strengthen epithelial regeneration.
The described above mechanisms contribute to an
increase in protective properties of intestinal epithelium.
In addition to protective properties the probiotics ac-
complish a digestive function as well [10].
At the current pharmaceutical market there are
presented different commercial forms of probiotic
preparations: dry, made with heat dehydration or freeze-
drying, as well as liquid ones – produced in growth or
protective media [11, 12, 18].
When developing the novel forms for immunobio-
logical preparations and dietary supplements a special
attention is focused to the microorganism preparations,
immobilized on/in different carriers and their metabo-
lites. Since the probiotics and enterosorbents are an
important link in dysbiosis therapy, we performed the
studies on designing probiotic preparations, immobilized
on carbon-containing enterosorbents [4, 5].
The immobilization on enterosorbents is administra-
ted primarily for probiotics with a poor ability to colonize
human intestine, such as S. boulardii yeast, on which
basis the Enterol preparation was designed. It was es-
tablished, that under experimental antibiotic-associated
and immune suppressive dysbiosis the S. boulardii
probiotic, immobilized on enterosorbents caused more
pronounced therapeutic effect, with noted more prolon-
ged persistence of S. boulardii in animal intestine
[1, 2].
Immobilized on carriers probiotics may be used to
design the novel preparations, comprising additional
components, which may be immobilized on carrier as
well. Most existing methods for storing cultures of mic-
roorganisms and microbial products occurred to be
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
23
ванный на энтеросорбентах пробиотик S. boulardii
оказывал более выраженный терапевтический эф-
фект, при этом наблюдалась более длительная пер-
систенция S. boulardii в кишечнике животных [1, 2].
Иммобилизованные на носителях пробиотики
могут использоваться для создания новых препа-
ратов, включающих дополнительные компоненты,
которые также могут быть иммобилизованы на но-
сителе. Большинство существующих методов хра-
нения культур микроорганизмов и микробных пре-
паратов оказались малопригодными для хранения
иммобилизованных дрожжей S. boulardii. Показа-
но, что дрожжевые клетки значительно утрачи-
вают жизнеспособность при субнулевых и умерен-
но низких температурах, а также в процессе тепло-
вой сушки и лиофилизации [3, 16]. Использование
промышленной холодильной техники с температу-
рой хранения –80°С и криогенного оборудования
позволяет хранить препарат при температуре –80
и –196°С.
Поскольку технологии криоконсервирования
иммобилизованных препаратов находятся в стадии
разработки, целью настоящего исследования было
сравнительное изучение влияния режимов охлаж-
дения и состава консервирующих сред на жизне-
способность свободных и иммобилизованных на
энтеросорбентах клеток S. boulardii.
Материалы и методы
Эксперименты проводили с клетками S. boular-
dii. Культура дрожжей была выделена из коммер-
ческого препарата «Энтерол-Т» («Biocodex», Фран-
ция). Клетки иммобилизовали на энтеросорбентах
«Сорбекс» («Экосорб», Украина) и «СУМС-1»
(«Новосибхимфарм», Россия) по разработанному
нами методу [5].
Энтеросорбент «СУМС-1» представляет собой
гранулы из окиси алюминия диаметром около
0,1 мм. На поверхность гранул нанесена пленка из
углерода (Инструкция по применению энтеросор-
бента «СУМС-1». Регистрационный № 93/174/7,
утверждена Фармакологическим государственным
комитетом Министерства здравоохранения РФ
12.03.1998). Препарат «Сорбекс» – гранулирован-
ный активированный уголь с размером гранул 0,20–
0,63 мм (Інструкція для медичного застосування
препарату «Сорбекс». Реєстраційне посвідчення
№UA/10156/01/01, затверджено наказом МОЗ Ук-
раїни №762 від 22.10.2009). Для иммобилизации к
сорбенту добавляли суспензию клеток с концент-
рацией 5×107 кл/мл. При этом с сорбентом связы-
валось 20% клеток. Свободные и иммобилизован-
ные клетки суспендировали в дистиллированной
воде, физиологическом растворе, пивном сусле
(8°Б), 5 и 10%-х растворах сахарозы, а также 5%-м
водном растворе ДМСО. Образцы охлаждали в
криопробирках объемом 2,0 мл со скоростями 1;
unsuitable for storage of S. boulardii immobilized
yeast. The yeast cells were shown as significantly loos-
ing their viability under subzero and moderately low
temperatures, as well as during heat drying and lyophi-
lization [3, 16]. The use of industrial refrigerators with
storage temperature of –80°C and cryogenic equip-
ment enables its storage at –80 and –196°C.
Since the cryopreservation techniques for immobi-
lized preparations are under development, this research
aim was a to perform a comparative study of influence
caused by cooling regimens and composition of preser-
vation media on the viability of S. boulardii free cells
and those, immobilized on enterosorbents.
Materials and methods
Experiments were carried-out with S. boulardii
cells. Yeast culture was isolated from a commercial
preparation Enterol-Т (Biocodex, France). Cells were
immobilized on enterosorbents Sorbex (Ekosorb, Uk-
raine) and SUMS-1 (Novosibchimfarm, Russia) accor-
ding to the developed by us method [5].
The enterosorbent SUMS-1 represents aluminum
oxide granules with diameter of about 0.1 mm. The
granule surface is covered with carbon film (Instruc-
tions for use of enterosorbent SUMS-1. Registration
93/174/7, approved by the State Pharmacological Com-
mittee of the Ministry of Health Care of Russia of
12.03.1998). Sorbex preparation is a granular activated
carbon with 0.20–0.63 mm granule size (Instruction
for medical application of Sorbex preparation. Re-
gistration Certificate UA/10156/01/01, approved by the
decree of the Ministry of Health Care of Ukraine N762
of 22.10.2009). Cell suspension of 5×107 cells/ml was
added to sorbent for immobilization; 20% of cells were
bound with sorbent after the procedure. Free and immo-
bilized cells were suspended in distilled water, physio-
logical saline, beer wort (8°B), 5 and 10% sucrose so-
lutions, as well as 5% DMSO aqueous solution. The
samples were cooled in 2.0 ml cryovials with 1, 5, 10,
15, 20, 40 degree/min rates down to –70°C and follow-
ing immersion into liquid nitrogen, as well as via direct
immersion into liquid nitrogen. Freezing was performed
using a programmable freezer Cryoson (Germany).
Frozen samples were stored in liquid nitrogen. Thawing
was done in a water bath at 30°C. The viability of free
cells was evaluated with the Koch’s pour-plate method
as a number of macrocolonies formed on wort agar-
agar [7]. The viability of immobilized cells was assessed
in the following way: the preparation was released of
non-immobilized cells via filtration, then the filter was
placed into a centrifuge tube with a special holder, cent-
rifuged and the resulting carrier-cells complexes were
transferred from filters into 0.2% agarose gel, after
serial dilutions in the gel the complexes were plated on
Petri dish by embedding [7]. After culturing we calcula-
ted the macrocolonies formed by complexes of carrier
and cells, immobilized on its surface (CFU).
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
24
5; 10; 15; 20; 40 град/мин до –70°С и затем погру-
жали в жидкий азот, а также прямым погружением
в жидкий азот. Замораживание проводили в прог-
раммном замораживателе «Cryoson» (Германия).
Замороженные образцы хранили при температуре
жидкого азота. Отогревали их на водяной бане при
30°С. Жизнеспособность свободных клеток оцени-
вали «чашечным» методом Коха по количеству
образовавшихся на сусло-агаре макроколоний [7].
Сохранность иммобилизованных клеток изучали
по разработанной нами методике: препарат осво-
бождали от неиммобилизованных клеток фильтра-
цией, затем фильтр переносили в центрифужную
пробирку со специальным держателем, центрифу-
гировали и полученные комплексы «носитель-
клетки» переносили с фильтров в 0,2%-й агарозный
гель, после серийных разведений в нем комплексы
высевали на чашки Петри глубинным способом
[7]. После культивирования учитывали макроколо-
нии, которые были сформированы комплексами
«носитель-клетки», иммобилизованные на его по-
верхности (КОЕ).
Статистическую обработку полученных ре-
зультатов проводили с помощью программы SPSS
Statistics 17.0.
Результаты и обсуждение
В экспериментах по криоконсервированию сво-
бодных клеток S. boulardii было установлено, что
на их жизнеспособность значительное влияние
оказывают скорость охлаждения и состав среды кон-
сервирования. При этом высокие показатели жиз-
неспособности отмечали даже при замораживании
клеток, суспендированных в физиологическом
растворе без добавления криопротекторов (рис. 1, A).
При замораживании образцов во всех средах кон-
сервирования охлаждение со скоростью 1 град/мин
обеспечивало сохранение исходного количества
жизнеспособных клеток. При увеличении скорости
охлаждения показатели жизнеспособности клеток
снижались и достигали минимума в образцах,
замороженных погружением в жидкий азот.
При замораживании клеток, суспендированных
в пивном сусле и 5%-м водном растворе ДМСО,
изменение показателей жизнеспособности было
однотипным – с увеличением скорости охлаждения
количество жизнеспособных клеток уменьшалось
(рис. 1, B, C).
Наиболее высокие показатели жизнеспособнос-
ти наблюдали при замораживании в 5%-м раство-
ре сахарозы. В этом случае сохранение исходного
количества жизнеспособных клеток S. boulardii
обеспечивало замораживание со скоростями 1; 5;
10 град/мин (рис. 1, D). С увеличением скорости
охлаждения показатели жизнеспособности в этих
средах также снижались, достигая минимума в об-
The obtained results were statistically processed
using SPSS Statistics 17.0 Software.
Results and discussion
During experiments on cryopreservation of S.
boulardii free cells we established, that their viability
was strongly affected by cooling rate and preservation
medium composition. At the same time the high viability
was observed even under freezing of cells, suspended
in physiological saline without any cryoprotectant
(Fig. 1A). Freezing of samples in all preservation media
using cooling rate of with 1 deg/min allowed to preserve
the initial amount of viable cells. The increasing of
cooling rate led to a decrease in cell viability which
reached the minimum in the samples, frozen by immer-
sion into liquid nitrogen.
When freezing cells, suspended in beer wort and
5% DMSO aqueous solution, the change in viability
indices was similar, i. e. with increasing cooling rate
the number of viable cells decreased (Fig. 1B, C).
The highest viability indices were observed after
freeze-thawing in 5% sucrose solution. In this case
the preservation of initial viability of S. boulardii cells
was provided by freezing with 1; 5; 10 deg/min cooling
rates (Fig. 1D). Increasing of cooling rate resulted in
decrease of viability indices in these media and reached
the minimum in the samples, immersed into liquid nitro-
gen. Elevation of sucrose concentration up to 10% in
had no effect in terms of viability in the samples frozen
with 1 deg/min cooling rate. Statistically significant de-
crease in viability was observed in case of cooling with
5 and 10 deg/min rates (Fig. 1E). The established diffe-
rences in the protective effect between 5 and 10%
sucrose solutions were most likely due to the fact, that
a selectively permeable plasmatic membrane of yeast
cell is located under a rigid cell wall. Therefore, the
dehydration of a cell in hypertonic solution results in
deformation of plasmatic membrane areas, which are
not tightly bound with cell wall. If the hypertonicity of
extracellular solution rises the probability of damage
in cell membrane increases. Apparently, 10% sucrose
solution, being more hypertonic vs. intracellular solution
comparing to 5% solution results in in a more pronoun-
ced cell damage due to mentioned deformation [6].
When studying the viability of immobilized cells we
considered the macrocolonies, formed mainly by the
‘carrier-cells’ complexes. In different versions of this
experiment a part of macrocolonies was formed by
single non-adsorbed cells. However, this index varied
and was independent on both cooling regimen and pre-
servation medium composition.
The number of colony-forming complexes ‘carrier-
cells’ under the whole cryopreservation regimens was
established to be significantly lower, than during freez-
ing of cell suspensions. The maximum viability of cells,
immobilized on different carriers was observed if cooling
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
25
разцах, погруженных в жид-
кий азот. При повышении кон-
центрации сахарозы до 10%
в образцах, замороженных со
скоростью 1 град/мин, коли-
чество жизнеспособных кле-
ток не уменьшалось. При ох-
лаждении со скоростями 5 и
10 град/мин наблюдали досто-
верное снижение жизнеспособ-
ности (рис. 1, E). Установлен-
ные различия в выраженнос-
ти защитного действия меж-
ду 5 и 10%-ми растворами са-
харозы, вероятнее всего, свя-
заны с тем, что избирательно
проницаемая плазматическая
мембрана дрожжевой клетки
располагается под жесткой
клеточной стенкой. Поэтому,
когда клетка обезвоживается
в гипертоническом растворе,
области плазматической
мембраны, не связанные
плотно с клеточной стенкой,
подвергаются деформации.
По мере увеличения гипер-
тоничности внеклеточного
раствора вероятность по-
вреждения клеточной мем-
браны повышается. По-види-
мому, в 10%-м растворе саха-
розы, который является более
гипертоничным по отноше-
нию к внутриклеточному
раствору по сравнению с
5%-м раствором, указанная
деформация мембраны при-
водит к более выраженному
повреждению клеток [6].
При исследовании жизне-
способности иммобилизован-
ных клеток мы учитывали мак-
роколонии, образованные пре-
имущественно комплексами
«носитель-клетки». В разных
вариантах этого эксперимен-
та часть макроколоний была
образована единичными де-
with 1 deg/min rate. With increasing cooling rates the
number of colony-forming complexes in the samples
was significantly decreased (Fig. 2, 3). For example,
after cooling of cells, immobilized on enterosorbent
SUMS-1 with this rate, the post-thaw numbers of CFU
in the samples in physiological saline, beer wort, 5%
DMSO, 5% sucrose and in 10% sucrose solutions were
сорбированными клетками. Однако этот показа-
тель варьировал и не зависел от режима охлажде-
ния, а также состава среды консервирования.
Установлено, что количество колониеобразую-
щих комплексов «носитель-клетки» после исполь-
зования всех режимов криоконсервирования было
значительно ниже, чем при замораживании клеточ-
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100 *
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100 * * *
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
1 5 10 15 20 40 ↓N2
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
è
*
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100 *
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
1 5 10 15 20 40 ↓N2
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
beer wort; C – 5% DMSO aqueous solution; D – 5% sucrose aqueous solution;
E – 10% sucrose aqueous solution; * – p < 0.05 when comparing the results of
cooling with 1 degree/min rate and the other ones.
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
Рис. 1. Жизнеспособность свобод-
ных клеток дрожжей Saccharomyces
boulardii (% от контроля) после за-
мораживания с разными скоростя-
ми охлаждения: A – в физиологи-
ческом растворе; B – пивном сусле;
C – 5%-м водном растворе ДМСО;
D – 5%-м водном растворе сахаро-
зы; E – 10%-м водном растворе
сахарозы; ↓N2 – погружение в жид-
кий азот; * – р < 0,05 при сравнении
результатов использования скоро-
сти охлаждения 1 град/мин и осталь-
ных скоростей.
Fig. 1. Viability of free Saccharomyces
boulardii yeast cells (% of the control)
after freezing with different cooling
rates: A – in physiological saline; B –
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100 *
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
A B
C D
E
0
10
20
30
40
50
1 10 20 Ïîãðóæåíèå
â àçîò
*
0
10
20
30
40
50
1 10 20 Ïîãðóæåíèå
â àçîò
*
0
10
20
30
40
50
1 10 20 Ïîãðóæåíèå
â àçîò
*
0
10
20
30
40
50
1 5 10 15 20 40
*
0
10
20
30
40
50
1 15 Ïîãðóæåíèå
â àçîò
*
26
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
Рис. 2. Жизнеспособность иммоби-
лизованных клеток дрожжей Saccha-
romyces boulardii на «СУМС-1» (%
от контроля) после замораживания
с разными скоростями охлаждения:
A – в физиологическом растворе;
B – пивном сусле; C – 5%-м водном
растворе ДМСО; D – 5%-м водном
растворе сахарозы; E – 10%-м вод-
ном растворе сахарозы; ↓N2 – погру-
жение в жидкий азот; * – р < 0,05
при сравнении результатов исполь-
зования скорости охлаждения
1 град/мин и остальных скоростей.
Fig. 2. Viability of Saccharomyces
boulardii yeast cells, immobilized on
SUMS-1 (% of the control) after
freezing with different cooling rates:
22.2, 12.43, 17.60, 3.90 and 11.60%, correspondingly
(Fig. 2). When augmenting cooling rate from 5 deg/min
up to one provided by immersion into liquid nitrogen
the post-thaw number of CFU decreased in various
media down to 0.70–10.32%.
When freezing the Sorbex-immobilized cells with
1 deg/min cooling rate the numbers of CFU in the
samples with saline, beer wort, 5% DMSO, 5% sucro-
личия значений среднего количества КОЕ после
охлаждения со скоростью 5–40 град/мин и после
погружения в жидкий азот были недостоверными.
Представленные результаты свидетельствуют
о достаточно высокой исходной криорезистент-
ности дрожжей S. boulardii по сравнению с дру-
гими микробными клетками, относящимися к
низшим эукариотам [15]. При замораживании кле-
ных суспензий. Максималь-
ную сохранность клеток, им-
мобили-зованных на разных
носителях, также обеспечи-
вало охлаждение со скоростью
1 град/мин. С повышением
скоростей охлаждения коли-
чество колониеобразующих
комплексов в образцах досто-
верно снижалось (рис. 2, 3).
Так, при охлаждении с этой
скоростью клеток, иммобили-
зованных на энтеросорбенте
«СУМС-1», количество КОЕ
в образцах с физиологическим
раствором составляло 22,2%, с
пивным суслом – 12,43%, с 5%-
м раст-вором ДМСО – 17,60%,
с 5%-м раствором сахарозы –
3,90%, с 10%-м раствором са-
харозы – 11,60% (рис. 2). При
повышении скорости охлаж-
дения от 5 град/мин до скорос-
ти, обеспечиваемой погруже-
нием в жидкий азот количест-
во КОЕ снижалось в различ-
ных средах до 0,70–10,32%.
При охлаждении со скорос-
тью 1 град/мин клеток, иммо-
билизованных на энтеросор-
бенте «Сорбекс», количество
КОЕ в образцах с физиологи-
ческим раствором составляло
80,5%, с пивным суслом –
39,5%, с 5%-м раствором
ДМСО – 25,3%, с 5%-м раст-
вором сахарозы – 48,7%, с
10%-м раствором сахарозы –
42,0% (рис.3). При повышении
скорости охлаждения от
5 град/мин до скорости, обес-
печиваемой погружением в
жидкий азот, количество КОЕ
снижалось в различных сре-
дах до 2,6–6,1%.
При замораживании иммо-
билизованных клеток в разных
средах консервирования раз-
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
1 5 10 15 20 40 ↓N21 5 10 15 20 40 ↓N2
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
A – in physiological saline; B – beer wort; C – 5% DMSO aqueous solution; D –
5% sucrose aqueous solution; E – 10% sucrose aqueous solution; * – p < 0.05
when comparing the results of cooling with 1 degree/min rate and the other ones.
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
A
E
B
C D
0
10
20
30
40
50
1 10 20 Ïîãðóæåíèå
â àçîò
*
0
10
20
30
40
50
1 10 20 Ïîãðóæåíèå
â àçîò
*
0
10
20
30
40
50
1 10 20 Ïîãðóæåíèå
â àçîò
*
0
10
20
30
40
50
1 10 20 Ïîãðóæåíèå
â àçîò
*
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
1 10 20 Ïîãðóæåíèå
â àçîò
*
27
se and 10% sucrose solutions were 80.5, 39.5, 25.3,
48.7 and 42.0%, correspondingly (Fig. 3). When
elevating cooling rate from 5 deg/min up to the one
provided by immersion into liquid nitrogen the number
of CFU decreased in various media down to 2.6–6.1%.
During freezing immobilized cells in different
preservation media the differences of mean CFU num-
bers after cooling with 5–40 deg/min rates and after
immersion into liquid nitrogen were statistically insig-
nificant.
Presented results testify to quite a high initial
cryoresistance of S. boulardii yeast as compared with
other microbial cells, referring to lower eukaryotes
[15]. When freezing cell suspensions of this yeast
species namely such factors as cooling rate and
preservation medium composition are affecting cell
viability. If using all the studied preservation media the
cooling with 1 deg/min rate provided cell viability at
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
1 5 10 15 20 40 ↓N2
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
V
ia
bi
lit
y,
%
1 5 10 15 20 40 ↓N2
Скорость охлаждения, град/мин
Cooling rate, deg/min
точных суспензий этого вида дрожжей факторами,
влияющими на жизнеспособность клеток, являют-
ся скорость охлаждения и состав среды консерви-
рования. При использовании всех изученных сред
консервирования охлаждение со скоростью
1 град/мин обеспечивало жизнеспособность клеток
на исходном уровне. По-видимому, эта скорость
охлаждения оптимальна для данного вида клеток
в соответствии с положениями двухфакторной
теории криоповреждений [9, 17].
Комплексы «носитель-клетки» оказались более
криолабильными по сравнению со свободными
клетками. При этом охлаждение со скоростью
1 град/мин также обеспечивало максимальные
показатели жизнеспособности клеток, иммобили-
зованных на «Сорбекс» и СУМС-1. Это свиде-
тельствует о том, что видовая чувствительность
клеток вида S. boulardii к процессам кристалли-
Рис. 3. Жизнеспособность иммобилизованных клеток дрожжей Saccharomyces boulardii на «Сорбекс» (% от
контроля) после замораживания с разными скоростями охлаждения: A – в физиологическом растворе; B – пивном
сусле; C – 5%–м водном растворе ДМСО; D – 5%–м водном растворе сахарозы; E – 10%–м водном растворе
сахарозы; ↓N2 – погружение в жидкий азот; * – р < 0,05 при сравнении результатов использования скорости охлаждения
1 град/мин и остальных скоростей.
Fig. 3. Viability of Saccharomyces boulardii yeast cells, immobilized on Sorbex (% of the control) after freezing with
different cooling rates: A – in physiological saline; B – beer wort; C – 5% DMSO aqueous solution; D – 5% sucrose
aqueous solution; E – 10% sucrose aqueous solution; * – p < 0.05 when comparing the results of cooling with 1 degree/
min rate and the other ones.
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
A B C
D E
28
зации, зависящим от скорости охлаждения, не изме-
нялась после иммобилизации. Для выяснения при-
чин более низкой жизнеспособности иммобилизо-
ванных на носителях клеток по сравнению со сво-
бодными клетками необходимо изучить процессы
развития повреждающих физико-химических фак-
торов при замораживании этих объектов. На наш
взгляд, одним из возможных механизмов повреж-
дения является внутриклеточная кристаллизация,
вероятность которой повышается при заданной ско-
рости охлаждения по мере уменьшения поверх-
ностно-объемного отношения клетки и коэффициен-
та проницаемости клеточной мембраны для мо-
лекул воды [6]. При замораживании комплексов
энтеросорбентов с иммобилизованными на их по-
верхности клетками образование контактов между
поверхностями сорбентов и иммобилизованных
клеток эквивалентно уменьшению поверхности
клеток, поэтому наиболее высокие значения жизне-
способности наблюдали при самой медленной из
исследованных скоростей охлаждения.
Выводы
1. Впервые проведено исследование жизнеспо-
собности иммобилизованных на энтеросорбентах
клеток пробиотика S. boulardii. Наиболее высокие
показатели жизнеспособности в различных консер-
вирующих средах обеспечивало охлаждение со
скоростью 1 град/мин. Повышение скорости ох-
лаждения до 5–40 град/мин и погружение в жидкий
азот приводили к достоверному снижению коли-
чества КОЕ, образованных комплексами «носи-
тель-клетки».
2. На жизнеспособность иммобилизованных
клеток в процессе криоконсервирования влияют
физико-химические свойства материала носителя.
Более высокие показатели жизнеспособности
отмечены в эксперименте с клетками, иммобили-
зованными на энтеросорбенте «Сорбекс».
3. При охлаждении иммобилизованных клеток
со скоростью от 5 до 40 град/мин и погружении в
жидкий азот состав исследуемых консервирующих
сред не оказывает значимого влияния на колоние-
образующую способность комплексов «носитель-
клетки».
4. Показатели жизнеспособности свободных
клеток достоверно выше, чем у комплексов «но-
ситель-клетки» при всех режимах замораживания.
Максимальную жизнеспособность свободных
клеток также обеспечивает охлаждение со ско-
ростью 1 град/мин. При данной скорости охлажде-
ния в изучавшихся средах консервирования жиз-
неспособность клеток S. boulardii сохранялась
на исходном уровне.
Авторы выражают глубокую благодарность к.б.н.
Ю.А. Петренко за ценные замечания.
initial level. This cooling rate is apparently optimal for
this cell species according to the statements of two-
factor theory of cryoinjury [9, 17].
The ‘carrier-cells’ complexes occurred to be more
cryolabile as compared to the non-adsorbed free cells.
In this case, cooling with 1 deg/min rate provided the
maximum viability indices for cells, immobilized on
Sorbex and SUMS-1. This testifies to the fact, that a
specific sensitivity of S. boulardii cells to crystallization
processes, depending on cooling rate, remained unchan-
ged after immobilization . To clarify the reasons for
lower viability of cells, immobilized on carriers as com-
pared to free cells it is necessary to study the develop-
ment of physical and chemical factors of injury during
freezing of these objects. We believe that one of the
possible mechanisms of injury is intracellular crystal-
lization, which probability increases under the particular
cooling rate with decreasing of a cell surface-to-volume
ratio as well as and cell membrane permeability coef-
ficient for water molecules [6]. When freezing entero-
sorbent complexes with cells, immobilized on their
surface, the formation of contacts between adsorbent
surfaces and immobilized cells corresponds to the re-
duction of cell surface, that is why the highest viability
indices were observed under the slowest cooling rates
among the studied ones.
Conclusions
1. For the first time there was studied the viability
of S. boulardii probiotic cells, immobilized on entero-
sorbents. The highest viability in different preservation
media was provided by cooling with 1 deg/min rate.
The augmentation of cooling rate up to 5–40 deg/min
and immersion into liquid nitrogen resulted in a statistica-
lly significant reduction in CFU number, formed by the
‘carrier-cells’ complexes.
2. The viability of immobilized cells during cryo-
preservation is affected by physical and chemical pro-
perties of carrier material. Higher indices of viability
were noted in the experiments with cells, immobilized
on Sorbex enterosorbent.
3. In the case of cooling of immobilized cells with
the rate from 5 to 40 degree/min and immersion into
liquid nitrogen the composition of the studied preser-
vation media had no significant effect on colony forming
ability of ‘carrier-cells’ complexes.
4. The viability indices for non-adsorbed free cells
were statistically and significantly higher than in ‘car-
rier-cells’ complexes after performing all the studied
freezing regimens. The maximum viability of free cells
was also provided by cooling with 1 degree/min rate.
Using this cooling rate in all the studied preservation
media did not change the viability of S. boulardii cells
comparing to initial one.
The authors akmowledge Dr. Yu.A. Petrenko for his
valuable comments.
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
29
Литература
1. Бабинец О.М., Высеканцев И.П., Марценюк В.Ф. Биоло–
гические свойства нативных и криоконсервированных
пробиотиков, иммобилизованных на энтеросорбентах //
Імунологія та алергологія: Наука і практика. – 2010. – №1.–
С. 126.
2. Бабинец О.М., Высеканцев И.П., Марценюк В.Ф. Терапев-
тическое действие иммобилизованных пробиотиков Sac-
charomyces boulardii и Bifidobacterium bifidum при экспе-
риментальном химиотерапевтическом дисбиозе, сопровож-
дающемся транслокацией кишечной микрофлоры // Імуно-
логія та алергологія: Наука і практика. – 2011. – №1.– С. 61.
3. Бекер М.Е., Дамберг Б.Э., Рапопорт А.И. Анабиоз микро-
организмов. – Рига: Зинатне, 1981. – 253 с.
4. Высеканцев И. П., Бабинец О. М., Марценюк В. Ф., Шати-
лова Л. Е. Сохранность биологических свойств иммобили-
зованных пробиотиков после криоконсервирования //
Материалы VII Международной научной конференции
«Современное состояние и перспективы развития микро-
биологии и биотехнологии». – Минск, 2010. – С. 102–103.
5. Высеканцев И.П., Бабинец О.М., Марценюк В.Ф., Шатило-
ва Л.Е. Сравнительное изучение адсорбции стандартных
маркеров и пробиотиков Saccharomyces bouldarii и
Bifidobacterium bifidum на энтеросорбентах // Вісник
проблем біології і медицини.– 2011. – Вип.1.– С. 58–62.
6. Гордиенко Е.А., Пушкарь Н.С. Физические основы низко-
температурного консервирования клеточных суспензий.–
Киев: Наук. думка, 1994. – 143 с.
7. Луста К. А., Фихте Б. А. Методы определения жизнеспо-
собности микроорганизмов. – Пущино: ОНТИ НЦБИ АН
СССР, 1990. – 186 с.
8. Отраслевой стандарт «Протокол ведения больных.
Дисбактериоз кишечника». ОСТ 91500.11.0004–2003, Приказ
МЗ РФ № 231 от 09.06.2003 г.
9. Пушкарь Н.С., Белоус А.М., Иткин Ю.А. Низкотемператур-
ная кристаллизация в биологических системах. – Киев:
Наук. думка, 1977. – 242 с.
10.Ткаченко Е. И., Суворов А. Н. Дисбиоз кишечника. Руко-
водство по диагностике и лечению.– СПб: ИнформМед.,
2009. – 276 с.
11.Патент РФ 2118535, МПК A61K 35/74, C12N 11/14. Комп-
лексный бактериальный препарат / Ю.И. Бородин, В.А. Бур-
мистров, А.А. Гуськов и др.; №97104352/13; Заявл.
20.03.1997; опубл. 10.09.1998, Бюл. № 25.
12.Патент РФ 2164801, МПК7 А61К 35/74. Препарат-про-
биотик в сухой иммобилизованной форме / A.B. Молокеев,
Л.Г. Никулин, P.M. Ильина и др.; Заявл. 06.12.1999; Опубл.
10.04.2001, Бюл.№10.
13. Biancone L., Palmieri G., Lombardi A. et al. Cytoskeletal
proteins and resident flora // Dig. Liver Dis. – 2002. – Vol. 34,
Suppl. 2. – P. S34–36.
14. Czerucka D., Dahan S., Mograbi B. et al. Saccharomyces
boulardii preserves the barrier function and modulates the
signal transduction pathway induced in enteropathogenic
Escherichia coli-infected T84 cells // Infection and immunity. –
2000.– Vol. 68, №10. – P. 5998–6004.
15. Day J.G., Glyn N.S. Cryopreservation and freeze-drying
protocols / Ed. by J.G. Day, G. Stacey: Humana Press, 2007.–
347 р.
16. Hubalek Z. Protectants used in the cryopreservation of micro-
organisms // Cryobiology.– 2003.–Vol. 46, №3.– P. 205–229.
17. Mazur P., Leibo S.P., Chu E. H. Y. A two-factor hypothesis
of freezing injury // Exptl. Cell. Res.– 1972.– Vol. 71.– P. 345–355.
18. McFarland L.V. Meta-analysis of probiotics for the prevention
of antibiotic associated diarrhea and the treatment of clostridium
difficile disease // Am. J. Gastroenterol.– 2006.– Vol. 101, №4.–
P. 812–822 .
19. Saaverda J. Probiotics and infectious diarrhea // Am. J. Gast-
roenterol. – 2000. – Vol. 95, Suppl. S – P. S16–S18.
Поступила 06.12.2011
References
1. Babinets O.M., Vysekantsev I.P., Martsenyuk V.F. Biological
properties of native and cryopreserved probiotics, immobilized
on enterosorbents // Immunology and Allergology: Science and
Practice. – 2010. – N1.– P. 126.
2. Babinets O.M., Vysekantsev I.P., Martsenyuk V.F. Therapeutic
effect of immobilized probiotics Saccharomyces boulardii and
Bifidobacterium bifidum under experimental chemotherapeutic
dysbiosis, accompanying by gut flora translocation // Imunolo-
giya ta Alergologiya: Nauka i Praktyka. – 2011. – N1. – P. 61.
3. Beker M.E., Damberg B.E., Rapoport A.I. Anabiosis of micro-
organisms. – Riga: Zinatne, 1981.– 253 p.
4. Vysekantsev I.P., Babinets O.M., Martsenyuk V.F., Shatilova
L.E. Preservation of biological properties in immobilized pro-
biotics after cryopreservation // Proc. of VII International Scien-
tific conference “Actual State and Perspectives of Development
in Microbiology and Biotechnology”.– Minsk, 2010.– P. 102–103.
5. Vysekantsev I.P., Babinets O.M., Martsenyuk V.F., Shatilo-
va L.E. Comparative study of adsorbtion of the standard mar-
kers and probiotics Saccharomyces boulardii and Bifidobacte-
rium bifidum on enterosorbents // Visnyk Problem Biologii i
Meditsyny. – 2011. – Issue 1. – P. 58–62.
6. Gordienko E.A., Pushkar N.S. Physical grounds of low tempe-
rature preservation for cell suspensions.– Kiev: Naukova dum-
ka, 1994. – 143 p.
7. Lusta K.A., Fikhte B.A. Methods for determination of microorga-
nism viability. – Puschino, 1990. – 186 p.
8. Industry standard “Patients management protocol. Intestinal
dysbacteriosis”. Industry standard 91500.11.0004–2003,
decree of the Ministry of Health Care of Russia N231 of
09.06.2003.
9. Pushkar N.S., Belous A.M., Itkin Yu.A. Low temperature crys-
tallization in biological systems.– Kiev: Naukova dumka, 1977. –
242 p.
10. Tkachenko E.I., Suvorov A.N. Intestinal dysbiosis. Manual on
diagnosis and treatment.– St. Petersburg: InformMed., 2009. –
276 p.
11.Patent of Russian Federation 2118535, IPC A61K 35/74, C12N
11/14. Combined bacterial preparation / Yu.I. Borodin, V.A.
Burmistrov, A.A. Guskov et al.; N 97104352/13; Appl.
03.20.1997; publ. 10.09.1998, Bull. N 25.
12.Patent of Russian Federation 2164801, IPC7 A61K 35/74.
Preparation-probiotic in dry immobilized form / A.V. Molokeyev,
L.G. Nikulin, P.M. Ilyina et al.; Appl. 06.12.1999; Publ. 10.04.2001,
Bull. №10.
13. Biancone L., Palmieri G., Lombardi A. et al. Cytoskeletal
proteins and resident flora // Dig. Liver Dis. – 2002. – Vol. 34,
Suppl. 2. – P. S34–36.
14. Czerucka D., Dahan S., Mograbi B. et al. Saccharomyces
boulardii preserves the barrier function and modulates the
signal transduction pathway induced in enteropathogenic
Escherichia coli-infected T84 cells // Infection and immunity. –
2000.– Vol. 68, N10. – P. 5998–6004.
15. Day J.G., Glyn N.S. Cryopreservation and freeze-drying
protocols / Ed. by J.G. Day, G. Stacey: Humana Press, 2007.–
347 р.
16. Hubalek Z. Protectants used in the cryopreservation of micro-
organisms // Cryobiology.– 2003.–Vol. 46,N3.– P. 205–229.
17. Mazur P., Leibo S.P., Chu E. H. Y. A two–factor hypothesis
of freezing injury // Exp. Cell. Res. – 1972. – Vol. 71. – P. 345–
355.
18. McFarland L.V. Meta-analysis of probiotics for the prevention
of antibiotic associated diarrhea and the treatment of clostridium
difficile disease // Am. J. Gastroenterol. – 2006. – Vol. 101, N4. –
P. 812–822 .
19. Saaverda J. Probiotics and infectious diarrhea // Am. J. Gast-
roenterol. – 2000. – Vol. 95, Suppl. S – P. S16–S18.
Accepted 06.12.2011
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
|